PROBIOTIC PROPERTIES OF THE LACTIC ACID BACTERIA  ISOLATED FROM NA¬TIONAL DAIRY PRODUCTS OF MONGOLIA

Tsend-Ayush Chuluunbat; Ganina V.

doi:doi:

PROBIOTIC PROPERTIES OF THE LACTIC ACID BACTERIA ISOLATED FROM NA¬TIONAL DAIRY PRODUCTS OF MONGOLIA

Submit manuscript Download PDF
Text

To cite

Citations:

PROBIOTIC PROPERTIES OF THE LACTIC ACID BACTERIA ISOLATED FROM NA¬TIONAL DAIRY PRODUCTS OF MONGOLIA

Journal: FOOD PROCESSING: TECHNIQUES AND TECHNOLOGY Volume 28 № 1 , 2013

Rubrics: FOOD PRODUCTION TECHNOLOGY

UDK 63 Сельское хозяйство. Лесное хозяйство. Охота. Рыбное хозяйство

Tsend-Ayush Chuluunbat ¹

Ganina V. ²

Author and publication information

Authors:

1. Mongolian State University of science and technology

Ulaanbaator, Mongolia

2. Moscow State University of Food Production

Moskva, Moscow, Russian Federation

Type:

Article

Pages:

from 58 to 64

Status:

Published

Received:

07.03.2013

Accepted:

07.03.2013

Published:

07.03.2013

Subject area:

UDK 63 Сельское хозяйство. Лесное хозяйство. Охота. Рыбное хозяйство

Language:

Russian, English

Keywords:

Lactic acid bacteria, probiotic properties, dairy products.

Abstract and keywords

Abstract (English):
The aims of this study were to investigate the diversity of lactic acid bacteria (LAB) isolated from traditional Mongolian dairy products, and to estimate the probiotic potential of the isolated strains. We collected 69 samples of such traditional Mongolian dairy products as tarag, airag, aaruul, byasulag and eezgii, from which 543 LAB strains were isolated and identified on the basis of 16S ribosomal DNA sequence. The probiotic potential of the LAB isolates for making yoghurt was evaluated. All the LAB isolates were screened for tolerance to low pH and to bile acid, gas pro-duction from glucose, and adherence to Caco-2 cells. We found 10 strains that might possess probiotic properties, and identified them as Lactobacillus (L.) plantarum or L. paracasei subspecies, using 16S ribosomal DNA and carbo-hydrate fermentation pattern. These strains were differentiated from each other individually by randomly amplified polymorphic DNA analysis. In addition, it has to be noted that 6 of the 10 strains were isolated from the Dornogovi province khoormog.

Keywords:
Lactic acid bacteria, probiotic properties, dairy products.

Text

Publication text (PDF): Read Download

Введение

Молочнокислые бактерии и бифидобактерии, как сообщается в литературе, являются пробиотиками с полезными для здоровья свойствами [3–6, 8, 10].

В соответствии с данными рабочей группы Про-довольственной и сельскохозяйственной организации объединенных наций (ООН) [9] и Всемирной орга-низации здравоохранения (ВОЗ) [10] пробиотические бактерии определены как живые микроорганизмы, которые полезны при приеме внутрь в адекватных количествах.

Монгольская культура питания отличается от за-падных культур, особенно в потреблении кисло-молочных продуктов. Молочные продукты занимали одно из ведущих мест в питании кочевых народов Монголии, для их изготовления употребляли молоко разных видов домашних животных (коров, овец, коз, яков, кобыл и верблюдиц). Национальные кисло-молочные продукты Монголии – ааруул, ээзгий и бяслаг – являются наиболее употребляемыми, но сообщений о составе их микрофлоры нами не об-наружено, в то время как о микробиологическом составе тарага, хоормога и айрага имеются данные в литературе. В Монголии и Внутренней Монголии (Китай) также проводятся исследования в данном направлении, но они пока очень малочисленны [7]. В Монголии для производства кисломолочных продук-тов применяют импортируемые типовые закваски из разных стран мира. Однако до настоящего времени в Монголии не организовано собственное произ-водство заквасок для национальных кисломолочных продуктов. В этой связи выделение и изучение свойств микрофлоры таких национальных кисло-молочных продуктов, как тараг, хоормог, ааруул, бяслаг, ээзгий, является актуальной задачей.

Объекты и методы исследований

Объектами исследований были тараг (идентичен йогурту), хоормог – кисломолочный продукт из вер-блюжьего молока, айраг – кисломолочный напиток из кобыльего молока, бяслаг (типа сыра) и другие продукты, полученные в частных хозяйствах. Всего было изучено 66 образцов традиционной монголь-ской молочной продукции (табл. 1), которые отобраны из трех регионов: Тов, Хубсугул и Дор-ноговь. В исследованиях применяли стандартные методы биохимических и микробиологических ис-следований, а также генетические методы, в част-ности 16S-рибосомальной ДНК.

Таблица 1

Названия исследованных национальных молочных продуктов,

изготовленных из разного молочного сырья в регионах Тов, Хубсугул и Дорноговь

Наимено-вание региона	Местность	Продукты
		Тараг и хоормог					Айраг	Ааруул	Бяслаг	Ээзгий
		Ко-рова	Коза	Вер-блюд	Овца	Як	Кобыла	Корова	Корова	Корова
Тов	Улаанбаатар	8	3				5	5		3
Тов	Алтанбулаг	11	6		2	1	2	3	1	2
Хубсугул	Мурун	8
Дорноговь	Сайншанд			6
Всего		27	9	6	2	1	7	8	1	5

Результаты и их обсуждение

Выделение и идентификация штаммов молочно-кислых бактерий. Для предварительной идентифи-кации все колонии, выделенные с питательных сред MRS и GYP, окрашивали по Граму и тестировали на каталазную активность. Из образцов национальных молочных продуктов выделили 543 изолята, все они были грамположительными и каталазанегативными (табл. 2). Штаммы, которые были грампозитивными и каталазанегативными, отнесены к молочнокислым бактериям.

Tаблица 2

Количество выделенных штаммов

из кисломолочных продуктов

Название продукта	Количество выделенных штаммов молочнокислых бактерий
Название продукта	Количество	%
Тараг и хоормог	420	77,3
Айраг	67	12,3
Ааруул	41	7,6
Бяслаг	15	2,8

Большинство штаммов молочнокислых бактерий выделено из тарага и хоормога – 77,3 % и составляло 420 штаммов, из айрага – 12,3 % и
составляло 67 штаммов, из ааруула – 7,6 % и сос-тавляло 41 штамм, из бяслага – 2,7 % и составляло 15 штаммов. Штаммы, выделенные из тарага и хоормога, классифицированы на 17 видов с при-менением метода 16S-рибосомальной ДНК. Все штаммы, выделенные из айрага, классифицированы на 12 видов; из ааруула – на 10 видов; из бяслага – на 5. Штаммы, выделенные из тарага, идентифициро-вали на основе 500 пар оснований цепи, начиная с 5^’ конца 16S-рибосомальной ДНК (16S rДНК). Полученные данные представлены в табл. 3.

Большинство среди выделенных штаммов отнесено к следующим таксономическим группам: Lacto-bacillus (L.) delbrueckii ssp. bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus fermentum, Streptococcus (Str.) thermophilus. Представленные результаты иденти-фикации штаммов микроорганизмов из продукта с одним названием, но полученного на основе молока разных сельскохозяйственных животных свидетель-ствуют и о разнообразном составе присутствующей в них микрофлоры. Это можно объяснить тем, что культура и получение монгольских молочных продуктов различны, а поэтому они могут включать потенциально необычные микроорганизмы. Резуль-таты проведенных исследований позволяют заклю-чить, что доминирующими видами молочнокислых бактерий в тараге являются L. delbrueckii ssp. bulga-ricus, L. helveticus, L. fermentum и S. thermophilus.

Таблица 3

Штаммы и количество LAB изолятов,

выделенных из тарага

	Молоко
	корова	коза	верблюд	овца	як
Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus	91	41	9	7	4
Lactobacillus helveticus	58	8	10		1
Lactobacillus fermentum	27	17	10		3
Streptococcus thermophilus	39	3		1
Enterococcus durans	15	1
Lactococcus lactis ssp. lactis	4	7	4
Lactobacillus pentosus	6	1	5
Weissella confusa	10
Lactobacillus kefiri	6		1
Lactobacillus paracasei ssp. tolerans	2		4
Lactobacillus plantarum	1		4
Pediococcus parvulus	5
Leuconostoc citreum	1	2	2
Lactobacillus paracasei ssp. paracasei	1		3
Enterococcus faecium	2		1
Leuconostoc mesenteroides	1		1
Weissella viridescens	1
Всего	270	80	54	8	8

Проверка выделенных штаммов на пробиоти-ческую активность. Выделенные штаммы молочно-кислых бактерий из монгольских молочных продук-тов были проверены на пробиотическую активность. Одной из важнейших характеристик, применяемых при отборе пробиотических штаммов, является их резистентность к желудочному соку и желчным кислотам. Выживаемость бактерий в искусственном желудочном соке анализировали путем проведения теста на толерантность к желчным кислотам путем выращивания в GYP бульоне, содержащем 0,2 % бычьей желчи.

Результаты исследований показали, что из 543 ис-следованных штаммов только 126 росли в среде бульона с добавлением 0,25 % желчи, т.е. были толерантны к желчным кислотам. Далее эти штаммы были тестированы на толерантность к желудочному соку. Считали, что штаммы толерантны к желу-дочному соку, если после их инкубации в течение 3 ча-сов c 0,04 % пепсином (pH 3,0) количество клеток составляло не менее 7 log КОЕ/мл. Из 126 штаммов, толерантных к желчным кислотам, 114 были толерант-ны к желудочному соку (табл. 4).

К важнейшей характеристической особенности пробиотических бактерий относят их адгезивную способность. Порогом адгезии считали, что коли-чество прикрепленных клеток к эпителию должно составлять 5,0×10⁴ КОЕ/мл. 42 штамма, проявляя-ющих гомоферментативные свойства, были тести-рованы на адгезивность к Сасо-2 клеткам. Установ-лено, что 10 штаммов с числом колоний от 7,0×10³ до 7,5×10⁴ КОЕ/мл и штамм L. plantarum 05АМ23 имели наивысшие значения адгезии к Сасо-2 клеткам (табл. 4 и 5).

Таблица 4

Результаты изучения пробиотических свойств штаммов,

выделенных из национальных ферментируемых молочных продуктов Монголии

Наименование штаммов	Количество	Выживаемость в желчи	Толерантность к низким рН	Газообразование (–)	Адгезия на Caco-2 клетках
Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus	155	8	2	2	0
Lactobacillus helveticus	115	0
Lactobacillus fermentum	78	50	50	0
Streptococcus thermophilus	43	5	0
Enterococcus durans	17	0
Weissella confusa	16	16	16	0
Lactococcus lactis ssp. lactis	20	2	2	2	0
Lactobacillus buchneri	7	1	1	0
Lactobacillus kefiri	10	0
Lactobacillus plantarum	11	11	11	11	5
Lactobacillus pentosus	13	9	9	9	0
Lactobacillus delbrueckii ssp. lactis	21	2	2	2	1
Pediococcus parvulus	5	5	5	5	0
Enterococcus faecium	5	0
Weissella viridescens	6	6	6	0
Lactobacillus paracasei ssp. torelans	6	5	5	5	2
Lactobacillus paracasei ssp. paracasei	4	4	4	4	2
Lactobacillus sakei	2	2	2	2	0
Leuconostoc mesenteroides	2	0
Leuconostoc citreum	6	0
Leuconostoc garlicum	1	0
	543	125	114	42	10

Таблица 5

Характеристика штаммов LAB, тестированных на пробиотическую активность

№	Штаммы	Толерант-ность к желчным кислотам (%)^*	Выживаемость при низких рН (log CFU/мл)^**	Адгезия на Caco-2 клетках (×10³CFU/мл)^***	Продукты	Молоко	Аймак	Местность
05AM23	L. plantarum	97,0	8,1	75,0	Айраг	Кобыла	Тов	Улаанбаа-тар
06Tca8	L. plantarum	88,9	8,2	7,0	Тараг	Верблюд	Дорноговь	Сайншанд
06Tca19	L. paracasei ssp. paracasei	87,9	8,0	11,0	Тараг	Верблюд	Дорноговь	Сайншанд
06Tca22	L. paracasei ssp. paracasei	92,6	8,0	12,0	Тараг	Верблюд	Дорноговь	Сайншанд
06Tca39	L. paracasei ssp. tolerans	87,4	7,3	18,0	Тараг	Верблюд	Дорноговь	Сайншанд
06Tca40	L. plantarum	85,4	7,7	13,0	Тараг	Верблюд	Дорноговь	Сайншанд
06Tca43	L. paracasei ssp. paracasei	85,6	7,0	16,0	Тараг	Верблюд	Дорноговь	Сайншанд
06CC2	L. plantarum	97,0	8,7	13,0	Ааруул	Корова	Тов	Алтанбу-лаг
06CC3	L. delbrueckii ssp. lactis	83,0	8,5	27,0	Тараг	Корова	Tов	Алтанбу-лаг
06CC9	L. plantarum	92,6	8,0	8,0	Ааруул	Корова	Тов	Алтанбу-лаг

^* Процент выживших колоний в GYP бульоне, содержащем 0,2 % бычьей желчи по сравнению с контролем.

^** Число выживших колоний LAB после обработки 0,04 % пепсином при pH 3,0 в течение 3 часов.

^*** Число выживших колоний LAB, адгезированных на Caco-2 клетках после инкубации.

Таблица 6

Углеводный профиль штаммов LAB, выбранных в качестве пробиотиков

№	05AM23	06Tca8	06Tca19	06Tca22	06Tca39	06Tca40	06Tca43	06CC2	06CC3	06CC9
Углеводы	1	1	2	2	2	1	2	1	3	1
D-Arabinose	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–
L-Arabinose	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–
D-Ribose	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
D-Xylose	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–
L-Xylose	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–
D-Galactose	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
D-Glucose	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
D-Fructose	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
D-Mannose	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
L-Rhamnose	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–
D-Mannitol	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
D-Sorbitol	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
Amygdalin	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
Esculin	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
Salicin	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
D-Celibiose	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
D-Maltose	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
D-Lactose	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
D-Melibiose	+	+	–	–	–	+	–	+	–	+
D-Sucrose	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
D-Trehalose	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
D-Melezitose	+	+	+	+	+	–	+	–	–	+
D-Raffinose	–	–	–	–	–	+	–	+	–	+
Gluconate	+	+	+	+	+	+	+	+	–	+
Starch	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–

Примечание: 1 – L. plantarum; 2 – L. paracasei ssp. paracasei; 3 – L. delbrueckii ssp. lactis; + позитивный; – негативный.

Известно, что молочные бактерии могут фер-ментировать углеводы с образованием преиму-щественно одного конечного продукта брожения, т.е. быть гомоферментативными, и с образованием нескольких конечных продуктов брожения, т.е. быть гетероферментативными. Данная характеристика очень важна для штаммов молочнокислых бактерий, поскольку позволяет определить целесообразность его применения в составе закваски для конкретного молочного продукта. Исследования показали, что из 114 штаммов, толерантных к желчным кислотам и желудочному соку, 42 штамма проявляли гомофер-ментные свойства, т.е. их можно применять для производства некоторых видов кисломолочных продуктов, в частности йогуртов.

Выделенные штаммы с высокой адгезивной спо-собностью были проанализированы по способности к сбраживанию углеводов. Полученные данные приведены в табл. 6.

Результаты идентификации изучаемых штаммов молочнокислых бактерий, за исключением 06TСа39 штамма, совпадали с результатами 16S-рибосо-мальной ДНК.

Для определения возможности применения вновь выделяемых штаммов молочнокислых бактерий в технологии молочных продуктов следует очень тща-тельно проверять все их характеристики. Интерес-ным представлялось определение гомологии между штаммами молочнокислых бактерий, отнесенных к одному виду, выделенных из одинаковых продуктов и одного места происхождения. Для этого был проведен RAPD-ПЦР анализ между следующими LAB штаммами: L. plantarum 06Tca8 – L. plantarum 06Tca40, L. plantarum 06CC2 – L. plantarum 06CC9, L. paracasei spp. paracasei 06Tca19 – L. paracasei spp. paracasei 06Tca22 – L. paracasei spp. paracasei 06Tca43. Анализ полученных результатов с при-менением этого метода позволяет сделать заключение, что штаммы 06Tca8 – 06Tca40, 06CC2 – 06CC9 и 06Tca19 – 06Tca22 – 06Tca43 могут представлять индивидуальные изоляты (рис. 1).

Результаты исследований показали, что штаммы 06Tca8 и 06Tca40, выделенные из хоормога, изготовленного из верблюжьего молока местности Сайншанд Дорноговь региона, и штаммы 06CC2 и 06CC9, выделенные из тарага, изготовленного из коровьего молока местности Алтанбулаг Тов аймака, относятся к L. plantarum. Штаммы 06ТСА19, 06Tca22 и 06Tca43, выделенные из хоормога, изго-товленного из верблюжьего молока местности Сайншанд Дорноговь региона, относятся к L. paraca-sei ssp. paracasei.

Основной и полезной микрофлорой в типовых йогуртах является L. delbrueckii ssp. bulgaricus и S. thermophilus. Технология производства тарага идентична технологии производства йогурта. На основе результатов проведенных исследований можно заключить, что доминирующими видами молочно-кислых бактерий в тараге являются L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. helveticus, L. fermentum и S. thermophilus. Поэтому тараг и йогурт можно рассматривать как одиноковый тип молочного продукта. Поскольку культура получения молочных продуктов в Монголии отличается от производства в других странах, они могут включать нехарактерные для йогурта микроорганизмы.

Рис. 1. Профили семи изолятов молочнокислых бактерий при проведении ПЦР со случайной ампли-фикацией: а – дорожка 1, 2, 5 и 6 – использован праймер р7, дорожка 3, 4, 7 и 8 – использован праймер р11, дорожка М – маркер ДНК, дорожка 1 и 3 – 06Tca8, дорожка 2 и 4 – 06Tca40, дорожка 5 и 7 – 06CC2, дорожка 6 и 8 – 06CC9; б – дорожка 1, 2 и 3 – использован праймер АТ41, дорожка 4, 5 и 6 – использован праймер ВТ05, дорожка М – маркер ДНК, дорожка 1 и 4 – 06ТСА19, дорожка 2 и 5 – 06Tca22, дорожка 3 и 6 – 06Tca43

В результате проведенных исследований выявлено, что доминирующими видами молочно-кислых бактерий в айраге были L. helveticus, L. delb-rueckii ssp. lactis, L. fermentum. Полученные данные отличаются от сообщенных ранее в работе [4]. Используя молекулярно-биологические методы, Watanabe et al. идентифицировали из айрага в основ-ном L. kefiranofaciens, которые не были обнаружены в исследованных нами образцах. В то же время обнаруженные и идентифицированные нами L. helveticus, L. delbrueckii ssp. lactis, L. fermentum не были обнаружены авторами работы [4]. Такие раз-личные результаты свидетельствуют о видовом разнообразии микрофлоры продукта айраг, ее воз-можном количественном и качественном изменении и необходимости продолжения исследований. Нами обнаружено, что в аарууле присутствуют гомофер-ментативные молочнокислые бактерии L. helveticus и L. delbrueckii ssp. lactis, а также гетероферментативные молочнокислые бактерии L. fermentum, L. buchnerii и W. сonfuse.

В бяслаге доминировали L. delbrueckii ssp. lactis и L. lactis spp. lactis. Есть вероятность того, что гетеро-ферментативные молочнокислые бактерии в аарууле могли быть внесены из внешней среды, так как по традиционной технологии ааруул изготавливают кипячением тарага и последующей сушкой на солнце.

Ээзгий изготавливают кипячением и упариванием на медленном огне створоженного молока с пос-ледующим дроблением сгустка и сушкой на солнце. Вероятно, из-за продолжительного высокотемпера-турного технологического процесса приготовления в ээзгий молочнокислых бактерий не обнаружили.

Установлено, что 6 из 10 штаммов молочно-кислых бактерий, выделенных из хоормога, облада-ют пробиотической активностью. Из 54 молочнокис-лых бактерий, идентифицированных как L. plantarum или L. paracasei ssp., 10 выделены из хоормога, изготовленного из верблюжьего молока.

Выводы

В результате проведенных исследований микро-флоры национальных молочных продуктов, отобран-ных в 3 регионах Монголии, удалось выделить и
идентифицировать 10 гомоферментативных про-биотических штаммов молочнокислых бактерий. Они были идентифицированы и классифицированы как L. plantarum, L. paracasei spp. Выделено большое количество гетероферментативных штаммов L. fer-mentum, толерантных к желчным солям и желу-дочному соку. Штаммы L. fermentum, которые имели сильную толерантность к желудочному соку и желчным солям, были также найдены в тради-ционных кенийских ферментированных молочных продуктах [11].

Таким образом, выделенные и идентифициро-ванные штаммы молочнокислых бактерий, обладаю-щие пробиотическими свойствами, можно рекомендовать для включения в коллекцию микроорганизмов Монголии и создания заквасок, применяемых в производстве кисломолочных продуктов.

References

1. Ganina, V.I. Novyy sinbioticheskiy kislomolochnyy napitok / V.I. Ganina, E.N. Tereshina, L.V. Kali¬nina, S.I. Perminov // Molochnaya promyshlennost'. - 2008. - № 10. - S. 85.

2. Ganina, V.I. Probiotiki. Naznachenie, svoystva i osnovy biotehnologii: monografiya / V.I. Ga¬nina. - M.: MGUPB, 2001. - 169 s.

3. Gupta, V. Probiotics / V. Gupta, R. Garg // Indian Journal of Medical Microbiology, 2009, 27. - R. 202-209.

4. Ishida, Y. Clinical effects of Lactobacillus acidophilus strain L-92 on perennial allergic rhinitis: a double-blind, placebo-controlled study / Y. Ishida, F. Nakamura, H. Kanzato, D. Sawada, H. Hirata, A. Nishimura, O. Kajimoto, S. Fujiwara // Journal of Dairy Science, 2005, 88, 527-533.

5. Kato, K. Randomized placebo controlled trial assessing the effect of bifidobacteria fermented milk on active ulcer¬ative colitis / K. Kato, S. Mizuno, Y. Umesaki, Y. Ishii, M. Sugitani, A. Imaoka, M. Otsuka, O. Hasunuma, R. Kurihara, A. Iwasaki, Y. Arakawa // Alimentary pharmacology & therapeutics, 2004, 20, 1133-1141.

6. Rosenfeldt, V. Effect of probiotic Lactobacillus strains in children with atopic dermatitis / V. Rosenfeldt, E. Benfeldt, S.D. Nielsen, K.F. Michaelsen, D.L. Jeppesen, N.H. Valerius, A. Paerregaard // The Journal of allergy and clinical immunology, 2003, 111, 389-395.

7. Shuangquan. Microflora in traditional starter cultures for fermented milk, hurunge, from Inner Mongolia, China / Shuangquan, Burentegusi, Yu B, T. Miyamoto // Animal Science Journal, 2006, 77, 235-241.

8. Sullivan, Å. Probiotics and gastrointestinal diseases / Å. Sullivan, E.C. Nord // Journal of internal Medicine, 2005, 257, 78-92.

9. WHO, Health and nutritional properties of probiotics in food including powder milk with livelactic acid bacte¬ria, a joint FAO/WHO expert consultation // Cordoba, Argentina, 1-4 October 2001 [homepage on the Internet].

10. World health organization (WHO) [cited 13 July 2009]. Available from URL.

11. Mathara, J.M. Functional characteristics of Lactobacillus spp. From traditional Maasai fermented milk products in Kenya / J.M. Mathara, U. Schillinger, C. Guigas, C. Franz, P.M. Kutima, S.K. Mbugua, H.K. Shin, W.H. Holzapfel // International Journal of Food Microbiology, 2008, 126, 57-64.

This work is licensed under Creative Commons Attribution 4.0 International

Submit manuscript Download PDF
Text

To cite

Citations:

Confirmation

Регистрация