<!DOCTYPE article
PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.4 20190208//EN"
       "JATS-journalpublishing1.dtd">
<article xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" article-type="research-article" dtd-version="1.4" xml:lang="en">
 <front>
  <journal-meta>
   <journal-id journal-id-type="publisher-id">Food Processing: Techniques and Technology</journal-id>
   <journal-title-group>
    <journal-title xml:lang="en">Food Processing: Techniques and Technology</journal-title>
    <trans-title-group xml:lang="ru">
     <trans-title>Техника и технология пищевых производств</trans-title>
    </trans-title-group>
   </journal-title-group>
   <issn publication-format="print">2074-9414</issn>
   <issn publication-format="online">2313-1748</issn>
  </journal-meta>
  <article-meta>
   <article-id pub-id-type="publisher-id">42776</article-id>
   <article-id pub-id-type="doi">10.21603/2074-9414-2021-1-134-145</article-id>
   <article-categories>
    <subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="ru">
     <subject>ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ</subject>
    </subj-group>
    <subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="en">
     <subject>ORIGINAL ARTICLE</subject>
    </subj-group>
    <subj-group>
     <subject>ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ</subject>
    </subj-group>
   </article-categories>
   <title-group>
    <article-title xml:lang="en">Technology for the Bacillus megaterium Fodder Biomass Production</article-title>
    <trans-title-group xml:lang="ru">
     <trans-title>Разработка технологии производства биомассы Bacillus megaterium кормового назначения</trans-title>
    </trans-title-group>
   </title-group>
   <contrib-group content-type="authors">
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0001-9516-1103</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Баурина</surname>
       <given-names>Александра Владимировна</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Baurina</surname>
       <given-names>Aleksandra V.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <email>tur.alexandra96@gmail.com</email>
     <bio xml:lang="ru">
      <p>аспирант биологических наук;</p>
     </bio>
     <bio xml:lang="en">
      <p>graduate student of sciences in biology;</p>
     </bio>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-1"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0003-2651-9516</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Баурин</surname>
       <given-names>Дмитрий Витальевич</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Baurin</surname>
       <given-names>Dmitry V.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <bio xml:lang="ru">
      <p>кандидат технических наук;</p>
     </bio>
     <bio xml:lang="en">
      <p>candidate of technical sciences;</p>
     </bio>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-2"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-1787-5773</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Шакир</surname>
       <given-names>Ирина Васильевна</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Shakir</surname>
       <given-names>Irina V.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <bio xml:lang="ru">
      <p>кандидат технических наук;</p>
     </bio>
     <bio xml:lang="en">
      <p>candidate of technical sciences;</p>
     </bio>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-3"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-8158-7012</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Панфилов</surname>
       <given-names>Виктор Иванович</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Panfilov</surname>
       <given-names>Victor I.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <bio xml:lang="ru">
      <p>доктор технических наук;</p>
     </bio>
     <bio xml:lang="en">
      <p>doctor of technical sciences;</p>
     </bio>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-4"/>
    </contrib>
   </contrib-group>
   <aff-alternatives id="aff-1">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Российский химико-технологический университет имени Д. И. Менделеева</institution>
     <city>Москва</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">D. Mendeleev University of Chemical Technology of Russia</institution>
     <city>Moscow</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-2">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Российский химико-технологический университет имени Д. И. Менделеева</institution>
     <city>Москва</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">D. Mendeleev University of Chemical Technology of Russia</institution>
     <city>Moscow</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-3">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Российский химико-технологический университет имени Д. И. Менделеева</institution>
     <city>Москва</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">D. Mendeleev University of Chemical Technology of Russia</institution>
     <city>Moscow</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-4">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Российский химико-технологический университет имени Д. И. Менделеева</institution>
     <city>Москва</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">D. Mendeleev University of Chemical Technology of Russia</institution>
     <city>Moscow</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <volume>51</volume>
   <issue>1</issue>
   <fpage>134</fpage>
   <lpage>145</lpage>
   <self-uri xlink:href="http://fptt.ru/eng/?page=archive&amp;jrn=60&amp;article=12">http://fptt.ru/eng/?page=archive&amp;jrn=60&amp;article=12</self-uri>
   <abstract xml:lang="ru">
    <p>Введение. Получение белково-витаминных кормовых добавок для сельскохозяйственных животных является одной из актуальных задач современной промышленной биотехнологии. В Российской Федерации ежегодно образуется значительное количество вторичных продуктов переработки семян подсолнечника, которые являются перспективным источником для получения изолята белка подсолнечника. Целью исследования являлась разработка технологии производства бактериальной биомассы Bacillus megaterium кормового назначения.&#13;
Объекты и методы исследования. Изолят белка подсолнечника, ферментный препарат Protex 7L, а также штамм B. megaterium (ВКПМ В-3750). Определение содержания углеводов осуществляли модифицированным методом Бертрана. Определение аминного азота осуществляли формольным титрованием. Определение количества жизнеспособных клеток осуществляли методом Коха. Определение содержания протеиногенных аминокислот проводили методом капиллярного электрофореза.&#13;
Результаты и их обсуждение. Подсолнечный белок при обработке ферментными препаратами может стать альтернативным источником азота для культивирования промышленных микроорганизмов. В данной работе представлены результаты аминокислотного анализа изолята белка подсолнечника, а также ферментативного гидролизата, полученного с применением препарата Protex 7L. Сравнительный анализ содержания аминокислот  в гидролизате и исходном изоляте белка показал, что ферментативный гидролиз позволяет увеличить содержание свободных аминокислот в среде, доступных для питания микроорганизмов. Показана возможность культивирования штамма продуцента витаминов группы B на ферментативном гидролизате белка подсолнечника, полученного с применением препарата Protex 7L.&#13;
Выводы. Результаты сравнительного исследования показали, что ферментативный гидролизат белка подсолнечника может быть использован в качестве источника азота для культивирования продуцента витаминов группы В в качестве альтернативы дорогостоящему мясному пептону. Технико-экономическая оценка процесса культивирования B. megaterium на ферментативных гидролизатах белка подсолнечника при мощности производства 100 кг/год показала, что себестоимость белково-витаминной добавки составляет 413 руб/кг. Срок окупаемости капитальных затрат по расчетам составляет 1,5 года.</p>
   </abstract>
   <trans-abstract xml:lang="en">
    <p>Introduction. Obtaining protein and vitamin fodder is one of the urgent tasks that modern industrial biotechnology has to solve. Another task is a search of novel medium compositions for microbial fermentation that can lower production costs. Russian food industry produces a significant amount of sunflower seed processing byproducts every year. Sunflower meal is a promising source of sunflower protein isolate. The research objective was to develop a new technology for the production of Bacillus megaterium bacterial biomass for fodder purposes.&#13;
Study objects and methods. The research featured a sunflower protein isolate, an enzyme complex Protex 7L, and a B. megaterium strain (VKPM B-3750). The carbohydrate content was determined using a modified Bertrand method. Amine nitrogen was studied using formol titration, the number of viable cells – by the Koch method, the content of amino acids – by capillary electrophoresis. &#13;
Results and discussion. When processed with enzyme complexes, sunflower protein can be an alternative source of nitrogen for industrial fermentation. The study featured amino acid of sunflower protein isolate and enzymatic hydrolyzate obtained using Protex 7L. A comparative analysis of the content of amino acids in the hydrolyzate and the protein isolate showed that enzymatic hydrolysis can significantly increase the content of free amino acids in the medium available for microbial accumulation. The research proved that sunflower protein enzymatic hydrolyzate obtained using Protex 7L can be used to cultivate strains of B vitamins producers. &#13;
Conclusion. Sunflower protein enzymatic hydrolyzate can be used as a nitrogen source for B vitamins producer fermentation and as an alternative to expensive meat peptone. The research involved technical and economic assessment of the B. megaterium fermentation on enzymatic hydrolysates of sunflower protein at a production capacity of 100 kg per year. The cost of the protein-vitamin supplement was calculated as 413 rubles per kg, while the market price could reach 826 rubles per kg. The payback period for capital expenditures was estimated at 1.5 years. Thus, replacing commercial meat peptone with sunflower protein enzymatic hydrolyzate obtained with Protex 7L reduced the cost of 1 kg of feed additive by three times without affecting B. megaterium. Overproduction of B vitamins by the B. megaterium strain on a medium containing sunflower protein hydrolyzate requires optimization of fermentation conditions.</p>
   </trans-abstract>
   <kwd-group xml:lang="ru">
    <kwd>Подсолнечник</kwd>
    <kwd>шрот подсолнечный</kwd>
    <kwd>изолят белка</kwd>
    <kwd>ферментация</kwd>
    <kwd>ферментативный гидролиз</kwd>
    <kwd>кормовая добавка</kwd>
   </kwd-group>
   <kwd-group xml:lang="en">
    <kwd>Sunflower</kwd>
    <kwd>sunflower meal</kwd>
    <kwd>protein isolate</kwd>
    <kwd>fermentation</kwd>
    <kwd>enzymatic hydrolysis</kwd>
    <kwd>feed additive</kwd>
   </kwd-group>
  </article-meta>
 </front>
 <body>
  <p>ВведениеОдной из актуальных проблем современнойбиотехнологии является эффективное использованиевторичных продуктов сельского хозяйствадля получения полезных продуктов с высокойдобавленной стоимостью, направленных наповышение продуктивности животноводства, а такжерешение проблем экологического характера [1].Растительные белки обладают большим потенциаломдля использования в питании человека в качествеальтернативы животному белку [2]. Производствоживотного белка в 10 раз дороже, чем производстворастительного. При этом около 30 % растительногобелка выбрасывается или используется в кормленииживотных [3].Российская Федерация является одним из мировыхлидеров по урожайности семян подсолнечника. В2019 г. площадь посевов превысила 8,5 млн га, аурожайность составила 15,3 млн тонн.Семена подсолнечника являются богатымисточником жиров (от 30 до 50 %) и белков (от 14до 19 %). При производстве подсолнечного маслаобразуется значительное количество отработанноймассы, прошедшей экстракцию, с выделениемподсолнечного масла [4]. Утилизация вторичногопродукта производства подсолнечного масла– подсолнечного шрота – является актуальнойпроблемой [5]. Широкий спектр продуктовпереработки семян подсолнечника включаетзначительное число полупродуктов. В первуюочередь это шроты и жмыхи, состав которыхварьируется в зависимости от сорта и технологиипереработки. Шроты и жмыхи используются виндустрии кормов. Вторая группа полупродуктовполучается в результате глубокой переработки.К этой группе можно отнести сухие продукты– изоляты и концентраты белка пищевого икормового назначения, депротеинизированныйшрот и жидкие полупродукты – ферментативныеи кислотные гидролизаты (рис. 1). Сухойостаток, остающийся после экстракции масла(шрот подсолнечника), является ценнымисточником белка (30–50 % в пересчете на сухоевещество), в составе которого преобладаютдва типа белков: гелиантинины (60–80 %)и альбумины подсолнечника (25–35 %) [6].Ферментативный гидролиз подсолнечногошрота увеличивает содержание сырого белка впродукте и позволяет улучшить функциональныехарактеристики получаемого белка. Гидролизатподсолнечного шрота, полученный с применениемпапаина и грибной протеазы, может быть использованв качестве эмульгатора, антиоксиданта или белковойосновы для косметических продуктов [7].Шрот содержит большое количествоценных веществ (протеины, связанные сахара,минеральные и органические соли и т. д.) иможет эффективно использоваться в качествекорма, топлива или органических удобрений.Ранее разработана технология полученияпродукта с высокой добавленной стоимостью– изолята белка подсолнечника. Технологиявключает в себя ферментативную обработкуAnother task is a search of novel medium compositions for microbial fermentation that can lower production costs. Russian foodindustry produces a significant amount of sunflower seed processing byproducts every year. Sunflower meal is a promising sourceof sunflower protein isolate. The research objective was to develop a new technology for the production of Bacillus megateriumbacterial biomass for fodder purposes.Study objects and methods. The research featured a sunflower protein isolate, an enzyme complex Protex 7L, and a B. megateriumstrain (VKPM B-3750). The carbohydrate content was determined using a modified Bertrand method. Amine nitrogen was studiedusing formol titration, the number of viable cells – by the Koch method, the content of amino acids – by capillary electrophoresis.Results and discussion. When processed with enzyme complexes, sunflower protein can be an alternative source of nitrogen forindustrial fermentation. The study featured amino acid of sunflower protein isolate and enzymatic hydrolyzate obtained using Protex7L. A comparative analysis of the content of amino acids in the hydrolyzate and the protein isolate showed that enzymatic hydrolysiscan significantly increase the content of free amino acids in the medium available for microbial accumulation. The research provedthat sunflower protein enzymatic hydrolyzate obtained using Protex 7L can be used to cultivate strains of B vitamins producers.Conclusion. Sunflower protein enzymatic hydrolyzate can be used as a nitrogen source for B vitamins producer fermentation and as analternative to expensive meat peptone. The research involved technical and economic assessment of the B. megaterium fermentationon enzymatic hydrolysates of sunflower protein at a production capacity of 100 kg per year. The cost of the protein-vitaminsupplement was calculated as 413 rubles per kg, while the market price could reach 826 rubles per kg. The payback period for capitalexpenditures was estimated at 1.5 years. Thus, replacing commercial meat peptone with sunflower protein enzymatic hydrolyzateobtained with Protex 7L reduced the cost of 1 kg of feed additive by three times without affecting B. megaterium. Overproduction ofB vitamins by the B. megaterium strain on a medium containing sunflower protein hydrolyzate requires optimization of fermentationconditions.Keywords. Sunflower, sunflower meal, protein isolate, fermentation, enzymatic hydrolysis, feed additiveFor citation: Baurina AV, Baurin DV, Shakir IV, Panfilov VI. Technology for the Bacillus megaterium Fodder Biomass Production.Food Processing: Techniques and Technology. 2021;51(1):134–145. (In Russ.). https://doi.org/10.21603/2074-9414-2021-1-134-145.136Baurina A.V. et al. Food Processing: Techniques and Technology, 2021, vol. 51, no. 1, pp. 134–145протеолитическими препаратами шрота споследующей ультрафильтрацией, осаждением визоэлектрической точке, промывкой и вакуумнойсушкой [8]. Полученный неочищенный изолят белкаможет быть использован в качестве альтернативногоисточника аминного азота при культивированиипродуцентов витаминов группы В с получениемценной кормовой добавки для сельскохозяйственнойптицы и скота. Кормление сухими рассыпнымиили гранулированными комбикормами позво-ляет эффективно использовать сырьевыересурсы и с наименьшими затратами достигатьмаксимальной продуктивности [9]. Использованиевысокопротеинового подсолнечного концентратав рационе цыплят-бройлеров для замены соипродемонстрировало положительные результатыдля улучшения экономической эффективностиоткорма [10]. В связи с активным развитиемроссийского животноводства остро встаетвопрос получения белковых кормовых добавок,обогащенных витаминами, а также переработкиподсолнечного белка в сухой продукт. Это позволяетрассматривать исследования, направленные нарешение настоящих проблем, как имеющие большоепрактическое и социальное значение [11].Поиск альтернативных экономичных питатель-ных сред для культивирования штаммов проду-центов витаминов группы В является актуальнойзадачей современной биотехнологии [12]. Вряде исследований в качестве субстратов длякультивирования продуцентов витаминов группы Виспользовались следующие субстраты: кукурузныйэкстракт, отработанное подсолнечное масло,свекловичная меласса, соевые бобы [13–16].Продемонстрирован потенциал вторичных продуктовпереработки картофеля для получения кормовойбиомассы, обогащенной витаминами группы В [17].Однако в литературе не представлено информацииоб использовании в качестве компонентапитательных сред для культивирования продуцентоввитаминов группы В белка подсолнечника или егоферментативных гидролизатов.Целью исследования являлась разработкатехнологии производства бактериальной биомассыBacillus megaterium кормового назначения. Вработе представлены результаты использованияферментативной обработки изолята белкаподсолнечника, а также результаты расчета основныхтехнико-экономических показателей для получениябактериальной биомассы B. megaterium кормовогоназначения мощностью 100 кг/год.Объекты и методы исследованияПеречень используемого сырья, реактивов иматериалов, применяемых для получения кормовойбиомассы, обогащенной витаминами группы В,представлены в таблице 1.Технический изолят белка подсолнечникапроизводят из подсолнечного шрота, который поорганолептическим, химико-технологическими микробиологическим показателям долженсоответствовать требованиям, приведенным втаблице 2.Ферментативный гидролиз изолята белкаподсолнечника проводили в колбе ЭрленмейераРисунок 1. Разнообразие продуктов переработки семян подсолнечникаFigure 1. Products of sunflower seed processing137Баурина А. В. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2021. Т. 51. № 1 С. 134–145объемом 250 мл при 50 °С и pH 7. 10 г изолятабелка подсолнечника смешивали с 100 млдистиллированной воды, рН доводили с помощью2М NaOH или 2М HCl. 0,1 мл ферментногопрепарата добавляли к буферу PBS pH 7,2. Затемполученную смесь добавляли к суспензии белка.Гидролиз проводили на водяной бане в течение 24 чс использованием магнитной мешалки. Полученныегидролизаты использовали в качестве среды длякультивирования Bacillus megaterium.Штамм продуцент кормовой биомассыB. megaterium (ВКПМ В-3750) был приобретен вРоссийской национальной коллекции промышленныхмикроорганизмов ВКПМ. Он является продуцентомвитаминов группы В. B. megaterium выращивали наскошенном агаре при 37 °С в течение 24 ч. Затем 1 млсуспендированной клетки инокулировали в колбуЭрленмейера объемом 250 мл, содержащую 100 млпитательной среды. Культивирование проводили при37 °С на роторном шейкере при 180 об/мин. Через24 ч 10 мл посевной культуры переносили в колбуЭрленмейера объемом 250 мл, содержащую 100 млпитательной среды, и культивировали при 37 °С нароторном шейкере при 180 об/мин в течение 24 ч.Определение содержания редуцирующих ве-ществ (РВ) осуществляли модифицированнымметодом Бертрана. Определение аминногоазота осуществляли формольным титрованием.Определение количества жизнеспособных клетокосуществляли методом Коха. Определение содержа-ния протеиногенных аминокислот проводилиметодом капиллярного электрофореза с исполь-зованием системы «Капель-105» (длина волны 254 нм,температура 30 °С, давление 30 мбар, времяввода 5 с, напряжение 25 кВ, давление 0–50 мбар,время анализа 10–15 мин) в соответствии сГОСТ 55569-2013.Результаты и их обсуждениеБелковый концентрат получается при обработкеобезжиренного растительного шрота. Последующаяобработка позволяет получить изолят белка, нов продукте значительно снижается содержаниефенольных соединений и клетчатки. Нативныебелки растительного происхождения имеют плохуюрастворимость. Самая низкая растворимостьнаблюдается в области изоэлектрической точки.Ферментативный гидролиз белков, в отличие отхимического, дает возможность не только точечнорегулировать процесс в сторону полученияжелаемых продуктов гидролиза, но и получатьаминокислоты пищевого качества. При обработкебелкового изолята протеолитическими ферментнымипрепаратами образуются белковые гидролизаты,Таблица 1. Характеристика основного и вспомогательного сырьяTable 1. Fixed and auxiliary raw materials№ п/п Наименование сырья, реактивов и материалов Характеристика сырья1 Технический изолят белка подсолнечника Содержание сырого протеина не менее 85 %2 Ферментный препарат Protex 7L Протеолитическая активность не менее 1600 ед/гопределяется по результатам гидролиза азо-казеинапри pH 7,5 в течение 5 мин при 30 °С3 Натрий хлористый В соответствии с ГОСТ 4233-774 Лапрол 3003 В соответствии с ТУ 2226-022-10488057-955 Кислота соляная В соответствии с ГОСТ 3118-776 Натрия гидроокись В соответствии с ГОСТ 4328-77Таблица 2. Описание внешнего вида и потребительских свойств технического изолята белка подсолнечникаTable 2. Appearance and consumer properties of technical isolate of sunflower proteinНаименование показателей̆ Характеристика и значение показателяВнешний вид ПорошкообразныйЦвет Светло-кремовый/светло-желтый/серыйЗапах Не имеет специфического запаха; допускается наличиезапаха, свойственного подсолнечникуВлажность, %, не более 5,0Содержание сырого протеина % на сухое вещество, не менее 85,0Суммарное содержание растворимого протеина,% на сухое вещество, не менее83,8Содержание липидов, % на сухое вещество, не более 0,5Содержание NaCl, % на сухое вещество, не более 1,0Содержание неорганических веществ % на сухое вещество,не более1,0138Baurina A.V. et al. Food Processing: Techniques and Technology, 2021, vol. 51, no. 1, pp. 134–145обладающие высокой растворимостью в широкомдиапазоне pH и температур, по сравнению сисходными белками, а также характеризующиесяфункциональными свойствами (например, антиокси-дантной активностью). Обработка нативногобелка ферментными препаратами позволяетдостигнуть максимальной растворимости в областиизоэлектрической точки. Дальнейшая обработкаполучаемого изолята белка протеолитическимиферментными препаратами с образованиемподсолнечного пептона может улучшитьфункциональные характеристики белка.Препарат Protex 7L был выбран для проведенияферментативного гидролиза изолята белкаподсолнечника на основании ранее проведенныхисследований [18].Аминокислотные профили исходного изолятабелка подсолнечника и ферментативного гидролизатаизолята белка подсолнечника, полученного сприменением препарата Protex 7L, представленына рисунке 2. Аминокислотный профиль изолятабелка подсолнечника согласуется с результатами,полученными другими исследователями [19, 20].Содержание аминокислот в ферментативномгидролизате существенно превосходит содержаниесвободных аминокислот в исходном изоляте белкаподсолнечника.На основании данных аминокислотного анализаизолята белка подсолнечника и ферментативногогидролизата, полученного с применением препаратаProtex 7L, было предложено использованиеферментативного гидролиза изолята белкаподсолнечника протеолитическими препаратами дляулучшения его биодоступности. Это позволило бырасширить область применения белка. Например,в качестве источника азота при культивированиимикроорганизмов.Замена мясного пептона ферментативнымигидролизатами белка подсолнечника в качествеисточника азота не оказала негативного влияния нарост микроорганизмов (табл. 3).В результате ферментативной обработкивысокомолекулярные белковые комплексы всоставе изолята белка подсолнечника могут бытьРисунок 2. Аминокислотные профили изолята белка подсолнечника и ферментативного гидролизата изолята белкаподсолнечника, полученного с применением препарата Protex 7LFigure 2. Amino acid profiles of sunflower protein isolate and enzymatic hydrolyzate of sunflower protein isolate obtained using Protex 7LТаблица 3. Результаты культивирования Bacillus megaterium в контрольных средах,а также на ферментативном гидролизате белка подсолнечникаTable 3. Results of cultivation of Bacillus megaterium in control media and on enzymatic hydrolyzate of sunflower proteinПараметр ПодсолнечныйбелокМяснойпептонФерментативный гидролизат белкаподсолнечника, полученныйс использованием препарата Protex 7LКонцентрация РВ начальная, г/л 0,66 0,79 1,35Концентрация аминного азота начальная, мг/л 364,00 714,00 784,00Концентрация РВ конечная, г/л 0,36 0,25 1,07Концентрация аминного азота конечная, мг/л 84,00 28,00 84,00ln(КОЕ/мл) 17,58 21,64 21,72Степень потребления аминного азота, % 76,92 96,08 89,29Удельная скорость роста, μ, ч–1 0,11 0,31 0,32139Баурина А. В. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2021. Т. 51. № 1 С. 134–145Рисунок 3. Кривая роста ln (КОЕ/мл) Bacillus megaterium и потребления аминного азота (мг/л) на среде, содержащей изолятбелка подсолнечника, мясной пептон и ферментативный гидролизат белка подсолнечника с Protex 7LFigure 3. Growth curve ln (CFU/mL) of Bacillus megaterium and amine nitrogen consumption (mg/L) on a medium containing sunflower proteinisolate, meat peptone, and enzymatic hydrolyzate of sunflower protein with Protex 7LРисунок 4. Аппаратурная схема производства кормовой биомассы, обогащенной витаминами группы ВFigure 4. Apparatus scheme for the production of feed biomass fortitied with B vitaminsВР1ТП3Технический NaClизолят белкаподсолнечникаИнокулятB. megateriumВодаочищеннаяТехническийизолят белкаподсолнечникаNaClИнокулятB. megateriumТП2Protex 7LВодаочищеннаяH2O горКонденсатФермента-ционнаясуспензияТП4КонцентратТП5Биомассана фасовкуи упаковку140Baurina A.V. et al. Food Processing: Techniques and Technology, 2021, vol. 51, no. 1, pp. 134–145«разбиты» на доступные питательные веществадля роста бактерий. Сравнительные результатыкультивирования на контрольных средах и среде,содержавшей гидролизат белка подсолнечника,подтвердили, что предложенная схема обработкиможет быть применена для замены мясного пептонав составе питательных сред (рис. 3). Степеньпотребления аминного азота при культивированиибактерий на среде, содержавшей гидролизат белкаподсолнечника, составила 89,29 и 96,08 % на среде,содержавшей мясной пептон в качестве источникаазота. Удельная скорость роста микроорганизмов прикультивировании на ферментативном гидролизатебелка подсолнечника не уступала показателям прикультивировании на традиционной среде и составила0,32 и 0,31 ч–1 соответственно.Сверхпродукция витаминов группы B прикультивировании B. megaterium на средах сиспользованием ферментативных гидролизатов белкаподсолнечника требует дальнейших исследований иоптимизации процесса.На основании полученных результатовкультивирования была предложена аппаратурная(рис. 4) и принципиальная технологическая схемы(рис. 5) процесса культивирования B. megaterium(ВКПМ В-3750) на ферментативном гидролизатеизолята белка подсолнечника, полученного сприменением препарата Protex 7L.Технология получения кормовой биомассыB. megaterium, выращиваемой на ферментативномгидролизате изолята белка подсолнечника, включаетследующие стадии:– санитарная обработка помещений;– подготовка стерильной воды, воздуха;– приготовление и стерилизация питательной среды;– приготовление и стерилизация пеногасителя;– стерилизация оборудования и коммуникаций;– наработка чистой культуры продуцента и приго-товление инокулята;– подготовка и стерилизация титрантов;– ферментативный гидролиз;– ферментация;– концентрирование биомассы (выпаривание);– распылительная сушка биомассы;– взвешивание, фасовка, маркировка и хранениеготового продукта.Общие обозначения технологических стадийи операций: ТП – технологический процесс;ВР – вспомогательная работа; ПО – переработкаотходов, УМО – упаковка и маркировка готовойпродукции.Ферментативный гидролиз изолята белкаподсолнечника проводят в биореакторе с мешалкойобъемом 15 л с рабочим объемом 10 л (ТП2).Технический изолят белка подсолнечниказагружают в биореактор, добавляют очищеннуюводу и осуществляют перемешивание. Послетого как в биореакторе установится температура50 ºС добавляют раствор ферментного препарата.Гидролиз ведут на протяжении 24 ч с постояннымперемешиванием и контролем значения pH вдиапазоне 6,8–7,2. Подтитровку ведут при помощи10 % раствора HCl и 10 % раствора NaOH. Поистечении 24 ч реактор охлаждают до 37 °С.Процесс выращивания бактерий B. megateriumосуществляют периодическим способом (ТП3).Выращивание биомассы на питательнойсреде, содержащей технический изолят белкаподсолнечника (ТИБП), ведут в аппаратах сбарботажной системой аэрации. Готовый инокулятнепрерывно подают в ферментер в соотношении1/10 рабочего объема аппарата. Культивированиепроводят при pH 6,8–7,0 и температуре 35–37 °С.Время пребывания среды в аппарате 12 ч. Длярегуляции рН среды с помощью насоса из сборникаподается 10 %-ный раствор соляной кислоты или10 %-ный раствор аммиачной воды. Для контроляроста культуры производится отбор проб черезкаждые 4 и 12 ч с последующим определением КОЕ/мли концентрации витаминов группы В. ПоказательКОЕ/мл в конце ферментации должен составлятьне менее 1010 КОЕ/мл, а содержание витаминаВ12 в культуральной жидкости не менее 5 мг/л.Отработанный воздух поступает в систему очисткигазо-воздушных выбросов.Таблица 4. Описание внешнего вида и потребительских свойств кормовой добавки, обогащенной витаминами группы ВTable 4. Appearance and consumer properties of the feed additive fortified with B vitamins№ Наименование показателей Характеристика и значение показателей1 Внешний вид В виде порошка2 Цвет Зеленый3 Запах Не обладает специфическим запахом4 Влажность, %, не более 5,05 Содержание сырого протеина, % на сухое вещество, не менее 60,06 Содержание растворимого протеина, % на сухое вещество, не менее 60,07 Содержание липидов, % на сухое вещество, не более 0,58 Содержание поваренной соли, % на сухое вещество, не более 1,09 Содержание неорганических веществ % на сухое вещество, не более 1,0141Баурина А. В. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2021. Т. 51. № 1 С. 134–145Рисунок 5. Принципиальная технологическая схема производства кормовой биомассы, обогащенной витаминами группы ВFigure 5. Basic technological scheme for the production of feed biomass fortified with B vitaminsКТ1:c(O2)ВоздухатмосферныйСанитарная обработкапомещенийВР 1.3 ВР 1.2 ВР 1.1Подготовка материалов,оборудования, помещенийВР 1КТ2:СВ, %N, %Технический изолятбелка подсолнечникаNaClВода очищеннаяЛапрол ПС-2КультураB. megateriumHCl, 10 % р-рNaOH, 10 % р-рПодготовка стерильноговоздухаПодготовка и стерилизацияпитательной средыПодготовка пеногасителяВР 1.7 ВР 1.6 ВР 1.5 ВР 1.4с ВР 1.3Стерилизация оборудованияи коммуникацийПодготовка инокулятаПодготовка и стерилизациятитрантовФерментныйпрепарат Protex 7LПолиэтиленовыепакетыКТ3:КОЕ/мл,Витамин В12,мг/млСушка распылительнаяt = 280–90 ºC, до 94 % СВс ВР 1.3Ферментативныйгидролизt = 37 ºC, 24 часаФерментативный гидролизат;с ВР 1.4; с ВР 1.6; с ВР 1.7Ферментация.Периодический режим pH6.8–7.0, t = 37 ºC, 12 часовФерментационнаясуспензияВыпариваниеt = 60 ºC, до 20 % СВКонцентратБелково-витаминнаябиомасса (БВБ)ФасовкаКартон, бумага, Упаковка и маркировкаплёнка ПВХКарантинПотериПотериH2OконденсатОтработан-ный воздухКТ4:КОЕ/мл,СВ, %N, %КТ5:СВ, %КТ6:СВ, %КТ7:КОЕ/мл,Витамин В12,СВ, %N, %На очисткуУМО2 УМО1 ТП5 ТП4 ТП3 ТП2На утилизациюНа утилизациюНа утилизациюПотериНа утилизациюСгущение ферментационной суспензии осу-ществляют с применением вакуумных выпарныхаппаратов до достижения показателя СВ 20–30 %в течение 5 ч (ТП4). Потери на станции концентри-рования составляют 10 %.Бактериальную суспензию после ТП4 доводятдо остаточной влажности 10 % с использованиемраспылительной сушилки (ТП5). Концентрат изсборника направляется в дисковый распылитель,расположенный в верхней части распылительной142Baurina A.V. et al. Food Processing: Techniques and Technology, 2021, vol. 51, no. 1, pp. 134–145сушилки. Вращение распыливающего дискаосуществляется с помощью электропривода.Концентрат проходит по радиальным каналамдиска и под влиянием центробежной силыпревращается в мелкие капли с размерами 5–100 мкм.Эти капли оседают на коническое днище сушилкив течение нескольких секунд. За это времяпроисходит сушка биомассы до влажности 10 %.В качестве теплоносителя используются топочныегазы, полученные при полном сгорании топлива иразбавленные атмосферным воздухом до 300–350 °С.В качестве топлива в теплогенераторе сжигаетсямазут. Также можно использовать природный газ.Температура теплоносителя на выходе из аппаратапосле контакта с мелкодисперсной суспензией(испарение воды) составляет 90–95 °С. Суспензияпоступает на сушку с температурой 75 °С. Основноеколичество (80–85 %) высушенной биомассыотбирается в конусной части сушильной камеры.Высушенная биомасса подается в батареюциклонов по пневматической трубе, где происходитотделение биомассы от воздушного потока. Сухаябиомасса в виде порошка отбирается в самой нижнейчасти его конуса и из нижней части батареи циклонов.Выделяющиеся из него газо-воздушные выбросынаправляются на очистку. Затем сухая биомассабактерий поступает на упаковку и маркировкуготовой продукции. Отработанный воздух поступаетв систему очистки газо-воздушных выбросов.Готовый продукт кормового назначения свлажностью 10 % подается в бункер (ТП6). Далеебиомасса перемещается на автоматические весыдля взвешивания и упаковывается в крафт-мешкис клапанами в соответствии с ГОСТ 2226-88.С помощью транспортера и электропогрузчикамешки на поддонах размещаются в штабеляна складе (ГОСТ 20083-74).Основное назначение готовой продукции – добавкакормового назначения для сельскохозяйственнойптицы и скота, обогащенная витаминами группы В.Продукт по органолептическим, химико-техноло-гическим и микробиологическим показателямдолжен соответствовать требованиям, приведенным втаблице 4.Оптимальные условия для хранения кормовогопродукта: в закрытых пластиковых пакетах притемпературе до 20 °С и при влажности воздуха неболее 80 %. Хранить в темном месте. Необходимыеданные, указываемые на упаковке: название, датапроизводства и фасовки, номер партии и процентноесодержание сырого протеина. Срок годности – 1 год.На основании полученных результатов былирассчитаны основные технико-экономическиепоказатели процесса получения кормовой биомассыB. megaterium мощностью 100 кг/год (табл. 5).По результатам расчетов замена коммерческогомясного пептона на ферментативный гидролизатбелка подсолнечника, полученный с применениемферментного препарата Protex 7L, позволяет снизитьсебестоимость кормовой добавки в 3 раза: с 1266до 413 руб за 1 кг в результате снижения затрат насырье.ВыводыАминокислотный анализ ферментативныхгидролизатов изолята белка подсолнечника показал,что при обработке ферментным препаратом Protex7L гидролиз протекает эффективно. Концентрацияаминного азота в гидролизате составляет 784 мг/л.Содержание свободных аминокислот в гидролизатезначительно превышает содержание аминокислот висходном изоляте белка подсолнечника. Показано,что ферментативные гидролизаты изолята белкаподсолнечника могут быть использованы в качествеединственного источника питательных веществ прикультивировании Bacillus megaterium.В данной работе представлены результатыразработки технологической части проектаТаблица 5. Сводная таблица основных технико-экономических показателей проектируемого предприятияTable 5. Technical and economic indicators of the business projectНаименование показателя Единица измерения Показатели продуктаГодовой выпуск продукции в натуральном выражении кг 104Капитальные затраты тыс. руб 61768Удельные капитальные вложения руб 507Полная себестоимость единицы продукции руб 413,25Полная себестоимость годового выпуска продукции руб 42978Стоимость годового выпуска продукции руб 85956Валовая прибыль от реализации руб 42978Чистая прибыль руб 30698,6Стоимость основных производственных фондов руб 41218000Стоимость нормируемых оборотных средств руб 3200000Рентабельность продукции % 71,4Срок окупаемости капитальных затрат год 1,5производства бактериальной биомассы B. megateriumкормового назначения мощностью 100 кг/год.Себестоимость белково-витаминной биомассы(БВБ) сильно варьируется в зависимости от штамма-продуцента, субстратов, на которых происходиткультивирование. Технология биосинтеза БВБ впромышленных масштабах до сих пор находитсяна стадии разработки. Последние результатыисследований в данной области, позволяющиеповысить эффективность и удешевить масштабноепроизводство БВБ, помогут значительно увеличитьпоказатели данного производства.Расчетная стоимость получаемой продукциибактериальной биомассы B. megaterium кормовогоназначения составляет 413 руб/кг, в то время какрыночная цена может составлять 826 руб/кг. Этопозволяет достичь хороших технико-экономическихпоказателей производства со сроком окупаемости1,5 года.Таким образом, замена коммерческого мясногопептона на ферментативный гидролизат белкаподсолнечника, полученный с применениемпрепарата Protex 7L, позволяет сократитьсебестоимость 1 кг кормовой добавки в 3 раза безоказания негативного влияния на рост культуры.Сверхпродукция витаминов группы В штаммомB. megaterium на среде, содержащей гидролизатбелка подсолнечника, требует оптимизации условийкультивирования.Критерии авторстваА. В. Баурина – программное обеспечениеисследования, экспериментальная работа, обработкаданных, написание исходного текста публикации,подготовка финального текста публикации ивизуализация. Д. В. Баурин – концептуализация,методология, подготовка финального текстапубликации, формальный анализ. И. В. Шакир –методология исследования, валидация, подготовкафинального текста публикации, администрацияпроекта. В. И. Панфилов – концептуализация,ресурсы, общее руководство проектом,администрация проекта.Конфликт интересовАвторы заявляют об отсутствии конфликтаинтересов.ContributionA.V. Baurina provided software and visualization,performed experimental work, processed the data, draftedthe manuscript, and proofread the final text. D.V. Baurindesigned the research concept and methodology, preparedthe final manuscript, and performed the formal analysis.I.V. Shakir developed the research methodology,validated the results, worked on the final text, andsupervised the project. V.I. Panfilov helped to developthe concept, provided resources, performed the generalproject management, and supervised the project.Conflict of interestThe authors declare that there is no conflict of interestregarding the publication of this article.</p>
 </body>
 <back>
  <ref-list>
   <ref id="B1">
    <label>1.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Bio-processing of agro-industrial wastes for production of food-grade enzymes: Progress and prospects / P. S. Panesar, R. Kaur, G. Singla [et al.] // Applied Food Biotechnology. - 2016. - Vol. 3, № 4. - P. 208-227. https://doi.org/10.22037/afb.v3i4.13458.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Panesar PS, Kaur R, Singla G, Sangwan RS. Bio-processing of agro-industrial wastes for production of food-grade enzymes: Progress and prospects. Applied Food Biotechnology. 2016;3(4):208-227. https://doi.org/10.22037/afb.v3i4.13458.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B2">
    <label>2.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">The role of the anabolic properties of plant-versus animal-based protein sources in supporting muscle mass maintenance: A critical review / I. Berrazaga, V. Micard, M. Gueugneau [et al.] // Nutrients. - 2019. - Vol. 11, № 8. https://doi.org/10.3390/nu11081825.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Berrazaga I, Micard V, Gueugneau M, Walrand S. The role of the anabolic properties of plant-versus animal-based protein sources in supporting muscle mass maintenance: A critical review. Nutrients. 2019;11(8). https://doi.org/10.3390/nu11081825.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B3">
    <label>3.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">The environmental cost of protein food choices / J. Sabaté, K. Sranacharoenpong, H. Harwatt [et al.] // Public Health Nutrition. - 2015. - Vol. 18, № 11. - P. 2067-2073. https://doi.org/10.1017/S1368980014002377.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Sabaté J, Sranacharoenpong K, Harwatt H, Wien M, Soret S. The environmental cost of protein food choices. Public Health Nutrition. 2015;18(11):2067-2073. https://doi.org/10.1017/S1368980014002377.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B4">
    <label>4.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Multi-objective optimization of solid/liquid extraction of total sunflower proteins from cold press meal / S. Albe Slabi, C. Mathe, M. Basselin [et al.] // Food Chemistry. - 2020. - Vol. 317. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.126423.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Albe Slabi S, Mathe C, Basselin M, Framboisier X, Ndiaye M, Galet O, et al. Multi-objective optimization of solid/liquid extraction of total sunflower proteins from cold press meal. Food Chemistry. 2020;317. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.126423.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B5">
    <label>5.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Белковый потенциал семян подсолнечника. Исследования процессов получения пищевых белков из подсолнечного шрота / М. Л. Доморощенкова, Т. Ф. Демьяненко, И. В. Крылова [и др.] // Вестник Всероссийского научно-исследовательского института жиров. - 2020. - № 1-2. - С. 24-29.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Domoroshchenkova ML, Demjanenko TF, Krilova IV, Kamisheva IM. Protein opportunities of sunflower seeds. Research of processes of food protein production from sunflower oil meal. Vestnik of the All-Russia Scientific Research Institute of Fats. 2020;(1-2):24-29. (In Russ.).</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B6">
    <label>6.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Protein extracts from de-oiled sunflower cake: Structural, physico-chemical and functional properties after removal of phenolics / B. G. Subaşı, F. Casanova, E. Capanoglu [et al.] // Food Bioscience. - 2020. - Vol. 38. https://doi.org/10.1016/j.fbio.2020.100749.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Subaşı BG, Casanova F, Capanoglu E, Ajalloueian F, Sloth JJ, Mohammadifar MA. Protein extracts from de-oiled sunflower cake: Structural, physico-chemical and functional properties after removal of phenolics. Food Bioscience. 2020;38. https://doi.org/10.1016/j.fbio.2020.100749.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B7">
    <label>7.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Optimization of sunflower albumin extraction from oleaginous meal and characterization of their structure and properties / A. S. Sara, C. Mathé, M. Basselin [et al.] // Food Hydrocolloids. - 2020. - Vol. 99. https://doi.org/10.1016/j.foodhyd.2019.105335.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Sara AS, Mathé C, Basselin M, Fournier F, Aymes A, Bianeis M, et al. Optimization of sunflower albumin extraction from oleaginous meal and characterization of their structure and properties. Food Hydrocolloids. 2020;99. https://doi.org/10.1016/j.foodhyd.2019.105335.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B8">
    <label>8.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Green chemistry for the optimum technology of biological conversion of vegetable waste / A. S. Makarova, D. V. Baurin, M. G. Gordienko [et al.] // Sustainable Production and Consumption. - 2017. - Vol. 10. - P. 66-73. https://doi.org/10.1016/j.spc.2016.12.003.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Makarova AS, Baurin DV, Gordienko MG, Kudryavtseva EI. Green chemistry for the optimum technology of biological conversion of vegetable waste. Sustainable Production and Consumption. 2017;10:66-73. https://doi.org/10.1016/j.spc.2016.12.003.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B9">
    <label>9.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">The effectiveness of dietary sunflower meal and exogenous enzyme on growth, digestive enzymes, carcass traits, and blood chemistry of broilers / M. Alagawany, A. I. Attia, Z. A. Ibrahim [et al.] // Environmental Science and Pollution Research. - 2017. - Vol. 24, № 13. - P. 12319-12327. https://doi.org/10.1007/s11356-017-8934-4.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Alagawany M, Attia AI, Ibrahim ZA, Mahmoud RA, El-Sayed SA. The effectiveness of dietary sunflower meal and exogenous enzyme on growth, digestive enzymes, carcass traits, and blood chemistry of broilers. Environmental Science and Pollution Research. 2017;24(13):12319-12327. https://doi.org/10.1007/s11356-017-8934-4.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B10">
    <label>10.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Гавилей, Е. В. Влияние частичной замены соевого шрота подсолнечным концентратом в рационе цыплят-бройлеров на продуктивность и физиологическое состояние птицы / Е. В. Гавилей, С. Н. Панькова, О. А. Катеринич // Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства. - 2020. - № 23-1. - C. 120-127.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Gaviley EV, Panʹkova SN, Katerinich OA. Vliyanie chastichnoy zameny soevogo shrota polsolnechnym kontsentratom v ratsione tsyplyat-broylerov na produktivnostʹ i fiziologicheskoe sostoyanie ptitsy [Influence of partial replacement of soybean meal with sunflower concentrate in broiler chicken ration on productivity and physiological state of poultry]. Aktualʹnye problemy intensivnogo razvitiya zhivotnovodstva [Actual problems of intensive development animal husbandry]. 2020;(23-1):120-127. (In Russ.).</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B11">
    <label>11.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Mustafayev, S. K. Organization of fodder production based on sunflower seed waste / S. K. Mustafayev, E. O. Smychagin // Advances in Engineering Research. - 2018. - Vol. 157. - P. 429-434.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Mustafayev SK, Smychagin EO. Organization of fodder production based on sunflower seed waste. Advances in Engineering Research. 2018;157:429-434.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B12">
    <label>12.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Fang, H. Microbial production of vitamin B12: a review and future perspectives / H. Fang, J. Kang, D. Zhang // Microbial Cell Factories. - 2017. - Vol. 16, № 1. https://doi.org/10.1186/s12934-017-0631-y.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Fang H, Kang J, Zhang D. Microbial production of vitamin B12: a review and future perspectives. Microbial Cell Factories. 2017;16(1). https://doi.org/10.1186/s12934-017-0631-y.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B13">
    <label>13.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Improved propionic acid and 5,6-dimethylbenzimidazole control strategy for vitamin B12 fermentation by Propionibacterium freudenreichii / P. Wang, Z. Zhang, Y. Jiao [et al.] // Journal of Biotechnology. - 2015. - Vol. 193. - P. 123-129. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2014.11.019.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Wang P, Zhang Z, Jiao Y, Liu S, Wang Y. Improved propionic acid and 5,6-dimethylbenzimidazole control strategy for vitamin B12 fermentation by Propionibacterium freudenreichii. Journal of Biotechnology. 2015;193:123-129. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2014.11.019.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B14">
    <label>14.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Vitamin B12 biosynthesis over waste frying sunflower oil as a cost effective and renewable substrate / H. Hajfarajollah, B. Mokhtarani, H. Mortaheb [et al.] // Journal of Food Science and Technology. - 2015. - Vol. 52, № 6. - P. 3273-3282. https://doi.org/10.1007/s13197-014-1383-x.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Hajfarajollah H, Mokhtarani B, Mortaheb H, Afaghi A. Vitamin B12 biosynthesis over waste frying sunflower oil as a cost effective and renewable substrate. Journal of Food Science and Technology. 2015;52(6):3273-3282.  https://doi.org/10.1007/s13197-014-1383-x.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B15">
    <label>15.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Establishment of beet molasses as the fermentation substrate for industrial vitamin B12 production by Pseudomonas denitrificans / K.-T. Li, W.-F. Peng, J. Zhou [et al.] // Journal of Chemical Technology and Biotechnology. - 2013. - Vol. 88, № 9. - P. 1730-1735. https://doi.org/10.1002/jctb.4025.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Li K-T, Peng W-F, Zhou J, Wei S-J, Cheng X. Establishment of beet molasses as the fermentation substrate for industrial vitamin B12 production by Pseudomonas denitrificans. Journal of Chemical Technology and Biotechnology. 2013;88(9):1730-1735. https://doi.org/10.1002/jctb.4025.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B16">
    <label>16.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Microbial cell factories for the sustainable manufacturing of B vitamins / C. G. Acevedo-Rocha, L. S. Gronenberg, M. Mack [et al.] // Current Opinion in Biotechnology. - 2019. - Vol. 56. - P. 18-29. https://doi.org/10.1016/j.copbio.2018.07.006.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Acevedo-Rocha CG, Gronenberg LS, Mack M, Commichau FM, Genee HJ. Microbial cell factories for the sustainable manufacturing of B vitamins. Current Opinion in Biotechnology. 2019;56:18-29. https://doi.org/10.1016/j.copbio.2018.07.006.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B17">
    <label>17.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Conversion of potato industry waste into fodder yeast biomass / P. Patelski, J. Berlowska, M. Balcerek [et al.] // Processes. - 2020. - Vol. 8, № 4. https://doi.org/10.3390/pr8040453.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Patelski P, Berlowska J, Balcerek M, Dziekonska-Kubczak U, Pielech-Przybylska K, Dygas D, et al. Conversion of potato industry waste into fodder yeast biomass. Processes. 2020;8(4). https://doi.org/10.3390/pr8040453.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B18">
    <label>18.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Sunflower protein enzymatic hydrolysates as a medium for vitamin B2 and B12 biosynthesis / D. V. Baurin, J. M. Epishkina, A. V. Baurina [et al.] // Chemical Engineering Transactions. - 2020. - Vol. 79. - P. 145-150. https://doi.org/10.3303/CET2079025.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Baurin DV, Epishkina JM, Baurina AV, Shakir IV, Panfilov VI. Sunflower protein enzymatic hydrolysates as a medium for vitamin B2 and B12 biosynthesis. Chemical Engineering Transactions. 2020;79:145-150. https://doi.org/10.3303/CET2079025.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B19">
    <label>19.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Ultrasound pretreatment of sunflower protein: Impact on enzymolysis, ACE-inhibition activity, and structure characterization / M. Dabbour, R. He, B. Mintah [et al.] // Journal of Food Processing and Preservation. - 2020. - Vol. 44, № 4. https://doi.org/10.1111/jfpp.14398.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Dabbour M, He R, Mintah B, Golly MK, Ma H. Ultrasound pretreatment of sunflower protein: Impact on enzymolysis, ACE-inhibition activity, and structure characterization. Journal of Food Processing and Preservation. 2020;44(4). https://doi.org/10.1111/jfpp.14398.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B20">
    <label>20.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Localized enzymolysis and sonochemically modified sunflower protein: Physical, functional and structure attributes / M. Dabbour, J. Xiang, B. Mintah [et al.] // Ultrasonics Sonochemistry. - 2020. - Vol. 63. https://doi.org/10.1016/j.ultsonch.2019.104957.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Dabbour M, Xiang J, Mintah B, He R, Jiang H, Ma H. Localized enzymolysis and sonochemically modified sunflower protein: Physical, functional and structure attributes. Ultrasonics Sonochemistry. 2020;63. https://doi.org/10.1016/j.ultsonch.2019.104957.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
  </ref-list>
 </back>
</article>
